環(huán)氧乙烷滅菌確認(rèn)的主要目的，是要從微生物學(xué)角度證明過(guò)程的滅菌能力，因而確認(rèn)中一個(gè)重要環(huán)節(jié)是制備和選擇微生物挑戰(zhàn)的具體形式，一般有以下三種微生物學(xué)挑戰(zhàn)形式 ：

產(chǎn)品生物負(fù)載 (Bio-burden)，即以正常產(chǎn)品的自然生物負(fù)載做為微生物挑戰(zhàn)，其具體形式是產(chǎn)品本身 ；內(nèi)部過(guò)程監(jiān)測(cè)器材 (Internal Process Challenge Device, IPCD)，是將生物指示劑（Biological Indicator, BI）放置于產(chǎn)品內(nèi)部比較難滅菌的部位而形成的 ；

外部過(guò)程監(jiān)測(cè)器材 (External Process Challenge Device, EPCD)，是將生物指示劑放置于產(chǎn)品外部的某種載體中而形成的。

證明其相對(duì)抗性關(guān)系為 IPCD ≥產(chǎn)品生物負(fù)載。然而考慮到常規(guī)滅菌操作中，IPCD 的放置和取出需要兩次拆開(kāi)產(chǎn)品包裝（如托盤(pán)、紙箱），會(huì)帶來(lái)包裝污染等潛在質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)，且工作量也較大，使用 EPCD 是絕大多數(shù)人的選擇。當(dāng)使用 EPCD 時(shí)，同時(shí)需證明 IPCD 和 EPCD 之間的抗性關(guān)系為 EPCD ≥ IPCD。

相對(duì)抗性關(guān)系 IPCD ≥產(chǎn)品生物負(fù)載的證明：

此即 BI 合適性 (the appropriateness of BI) 的證明 , 通常有兩種證明方法 ：

無(wú)菌測(cè)試法：這種方法是將產(chǎn)品和 IPCD 用同一個(gè)亞致死周期（Sub-lethal Cycle）滅菌，之后分別進(jìn)行產(chǎn)品和 BI 的無(wú)菌測(cè)試。如果產(chǎn)品測(cè)試為無(wú)菌，而IPCD 呈現(xiàn)出部分陽(yáng)性結(jié)果，則說(shuō)明同樣的滅菌參數(shù)能對(duì)產(chǎn)品形成全殺滅，而不能對(duì) BI 形成全殺滅，故能證明 IPCD 對(duì)滅菌過(guò)程的抗性強(qiáng)于產(chǎn)品本身的抗性。

生物負(fù)載法：

這種方法即通過(guò)測(cè)試產(chǎn)品的自然生物負(fù)載和BI 的生物負(fù)載來(lái)比較，含數(shù)量上的比較和抗性上的比較。

數(shù)量上的比較即比較 BI 的孢子計(jì)數(shù)值和產(chǎn)品上的自然生物負(fù)載值。